就是要进行细胞计数,以客观的数据来表示肿瘤细胞的侵袭能力。
因是前期实验,因此只需要用直接计数法即可。
然后,即便是直接计数法,仍需要一定的实验步骤,才能相对客观反应——
先固定好细胞,不再让其移动。
用镊子小心取出小室,吸干上室培养基,用棉签轻轻擦拭Matrigel和上室内的细胞。取新的24孔板加入4%多聚甲醛600μL,将小室放入后固定20-30min。
然后再进行细胞染色!
取出小室,吸干上室固定液,移到预先加入约800μl0.1%-0.2%结晶紫的孔中染液的孔中,染色15-30min。除去未与细胞结合的结晶紫,用棉签轻轻擦拭小室的上侧,将非特异性结合于小室上表面的染料擦掉,以便后续镜检计数……
这一步,方子业非常期待,因为不管是别人的细胞实验,还是自己的,只要自己发现了,而且参与了实验,肯定就有学识点的收益!
两人转战到显微镜前…
*注:本文中涉及到的一些实验步骤,一部分是经简化版本,主要是完全一股脑地放上来,懂的人倒是看懂了,大部分人都没看懂,考虑到大部分书友的感受,大家看个大概即可。
总结:transwell实验是检测肿瘤细胞侵袭能力的,通过技术表示侵袭能力强弱,操作不算简单,但是一种证明能力的工具。
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